一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：建议首次传代比例为1:2，传代后每2天更换培养基。

备注：采用无菌离心管收集培养基用于过渡对比培养，若效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞运输处理

接收细胞后，应在细胞状态良好时灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，建议拍摄不同倍数的照片以备后续参考（最好拍摄40x、100x和200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。若未提供照片，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

在细胞未超过80%汇合度时，收集培养液至离心管，保留5ml培养基于37℃、5% CO2环境中；若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分变圆并脱落，立即轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基终止消化。
轻吹使细胞完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。
按1:2比例进行分瓶传代，补充5-8ml新的完全培养基，最终放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，PBS清洗一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻吹使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清后，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果需将细胞转入液氮罐，应在-80℃中存放24小时以上。

c、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意防护），迅速放入37℃水浴中解冻，直至管内无结晶。用75%酒精消毒外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中导致脱落，这是正常现象。若细胞脱落较多，请将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，然后加入1-2ml胰酶，消化1-2分钟，待细胞状态良好后终止消化。再次离心并重悬，然后按1:2比例分瓶传代并放入培养箱中。

五、售后条款

尊龙凯时-人生就是博致力于确保产品质量，但如有问题，依据如下条款处理：

在运输中存在问题，如细胞丢失、瓶破损、培养液漏液等，均可重发。
如细胞在收到48小时内出现污染问题，需提供实验结果以便核实后重发。
细胞若在干冰运输后复苏后24小时大部分未存活，需提供状态照片以便重发。
对于收到细胞在2天内未告知的问题，公司将不予重发。
如客户操作不当、非推荐培养体系所致状态不佳的一律不重发。

请在收到细胞后的3天内拍摄照片，以便确认细胞质量。如在4-7天内出现问题，需提供详细操作步骤，技术人员会依据情况确定责任并处理。